Manuale d'usu di u sistema d'analisi di laburatoriu cumpletamente automatizatu dynamic BIOSENSORS heliX cyto

U sistema heliX cyto hè cuncipitu per a citometria d'interazione à cellule unicellulari (scIC) per misurà a cinetica di ligame di molecule marcate fluorescentemente à bersagli nantu à e superfici cellulari in modu risoltu in u tempu.

Istruzzioni per l'usu di u produttu

Utilizendu u chip heliXcyto

U chip heliXcyto cuntene un unicu canale microfluidicu cù punti d'elettrodi per a cattura è a misurazione di e cellule. Assicuratevi u piazzamentu currettu di u chip è seguitate l'istruzzioni per intrappulà e cellule.

Chip di mantenimentu

Aduprate u Chip di Mantenimentu solu per operazioni di pulizia, test è manutenzione. Evitate di utilizallu per esperimenti per impedisce a contaminazione.

Running Buffer

Aduprate Running Buffer 1 (RB 1) durante e misurazioni. Consultate a scheda di compatibilità scIC in a guida principale per infurmazioni dettagliate.

Analisi di Sensorgram

Monitorate u sensorgramma in tempu reale in u software heliOS durante e misurazioni. Analizate a risposta fluorescente in u tempu per estrarre i tassi cinetichi.

Passivazione

Cunsiderate l'usu di a passivazione cum'è un passu facultativu per impedisce l'adsorbimentu di l'analiti incubendu un reagente di passivazione nantu à u chip.

Nurmalizazione

A nurmalizazione hè un prucessu per standardizà i dati per paragone è analisi. Segui e procedure di nurmalizazione secondu u manuale d'usu.

INTRODUZIONE

Questa guida hè pensata cum'è una breve panoramicaview di u sistema heliXcyto è di e so capacità. Tutti i capituli sò sviluppati in a guida principale heliXcyto chì si trova à https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

Terminologia heliXcyto Citometria d'interazione à cellula singola

A Citometria d'Interazione à Cellule Singole (scIC) hè una tecnulugia chì misura a cinetica di legame di una molecula marcata fluorescente (analita) à un bersagliu (ligandu) nantu à a superficia cellulare registrendu u signale fluorescente in modu risoltu in u tempu.

Analyte

L'analita hè una molécula marcata fluorescentemente in una fase mobile chì pò ligà si à un bersagliu nantu à a superficia di una cellula.

Ligandu

"Ligandu" hè u nome adupratu in u software heliOS per discrive un bersagliu nantu à a superficia cellulare à quale un analitu pò ligà si. Questu pò esse una molécula di ricettore, un lipidu, un zuccheru o un'altra molécula di a superficia cellulare.

Trappula cellulare

E trappule cellulari sò gabbie polimeriche biocompatibili è permeabili à u flussu, situate nantu à un chip heliXcyto. Sò cuncepite per catturà è immobilizà cellule di diverse dimensioni da circa 6 à 25 µm in u canale di flussu. E trappule cellulari sò dispunibili in 3 diverse dimensioni: chjuca, media è grande.

Chip heliXcyto

I chip heliXcyto cuntenenu un unicu canale microfluidicu cù aperture da ogni latu. Dui punti d'elettrodi d'oru sò situati in u mezu di u canale.

Un puntu serve cum'è puntu di riferimentu, è u secondu puntu porta gabbie di polimeri biocompatibili 3D per a cattura cellulare è serve cum'è puntu di misurazione. U puntu di misurazione pò cuntene 1 o 5 trappule di u listessu tipu.
U puntu di riferimentu permette a riferenza in tempu reale di u signale fluorescente raccoltu. U chip heliXcyto hè riutilizzabile è dispunibule.

Chip di mantenimentu

U Chip di Manutenzione hè un chip microfluidicu à canale unicu utilizatu per tutte l'operazioni di pulizia, test è manutenzione.
Queste operazioni includenu a rutina Clean & Sleep, a rutina Wake Up and Prime, u lavaggio di u sistema è u test di fluidica. Stu chip ùn deve esse adupratu per esperimenti veri cù suluzioni di cellule/proteine per impedisce un'ulteriore contaminazione di u chip.

Running Buffer

U buffer di esecuzione hè u buffer utilizatu in l'heliXcyto durante a misurazione. L'usu di Running Buffer 1 (RB 1) hè generalmente cunsigliatu.
Per più infurmazioni, riferitevi à a scheda di cumpatibilità scIC chì si trova in a guida principale.

Sensorgramma

Un sensorgramma scIC hè un graficu di a risposta di fluorescenza in conti per seconda (cps) in u tempu, chì illustra a progressione di una interazione nantu à o in e cellule. Sta curva pò esse viewin tempu reale in heliOS durante a misurazione.
Quandu si analizanu i sensorgrammi, si determina l'esponziale chì currisponde megliu à e tracce fluorescenti osservate è si estraenu i tassi cinetici (kon, koff).

Passivazione

A passivazione hè una tappa facultativa in a prova, induve un reagente di passivazione hè iniettatu nantu à u chip è incubatu per bluccà e superfici. Questu pò aiutà à prevene l'adsorbimentu di analiti nantu à i materiali di u chip.

Nurmalizazione

Una tappa di nurmalizazione hè aduprata per tene contu di e piccule differenze in i signali per via di a cullizzioni di signali da ogni puntu di misurazione da un detector separatu. Un colorante fluorescente di una cuncentrazione definita (basatu annantu à a più alta cuncentrazione di analiti è u gradu di marcatura di l'analiti) hè iniettatu à l'iniziu di un test. Questa tappa di nurmalizazione hè inclusa automaticamente in u metudu di misurazione, è u piccu di nurmalizazione misuratu hè adupratu per curregge automaticamente e differenze trà i detector durante l'analisi di i dati, prima di u riferimentu in tempu reale.

Principii di misurazione sciC

Applicazioni sciC

A citometria d'interazione à cellule unicellulari (scIC) misura i tassi cinetici è l'affinità di un analita marcatu fluorescente chì si lega è si stacca da u so bersagliu direttamente nantu à e cellule viventi.
A rilevazione di analiti in scIC hè indipendente da a dimensione è dunque pertinente à qualsiasi molecula da sub-nm à > 100 nm è pertinente à tutte e classi di molecule, da piccule molecule, peptidi, aptameri, nanocorpi, afficorpi, anticorpi, furmati di anticorpi bispecifici, proteine, complessi proteici, finu à vescicole (esosomi), nanoparticelle lipidiche è virus.

A tecnulugia scIC pò trattà i seguenti campi d'applicazione:

misurazione di u signale amplititudini in schermi di rilegatura
analisi cinetica di i tassi di kon è koff
Valutazione di l'affinità è di l'avidità per mezu di mudelli di adattamentu Koff è bifasicu
testi di specificità
quantificazione relativa di e proteine di membrana nantu à a superficia cellulare
studii di binning di epitopi è di cumpetizione
saggi d'inibizione
valutazione di l'internalizazione di e proteine mirate

Capacità di l'hardware di heliXcyto

Sistema Fluidicu

U sistema fluidicu di l'heliXcyto hè alimentatu da finu à 3 buttiglie di tampone diverse, chì permettenu variazioni in u funziunamentu è in u tampone di mantenimentu. E pompe in l'heliXcyto ponu esse impostate à velocità di flussu trà 20 è 500 µL/min, rispondendu à diverse esigenze.amprequisiti di le è di test. U canale di flussu di u chip si cunnetta à u sistema fluidicu per mezu di duie aperture. L'apertura di manca hè cunnessa à u sample, buffer, è linee di lavaggio, mentre chì l'apertura di u latu drittu hè ligata à a linea di rigenerazione.

Stu sistema fluidicu bidirezionale permette una cattura cellulare stabile mentre si eseguiscenu diverse tappe di una misurazione è infine a rigenerazione di u chip per a riutilizazione di u chip in u test.
Figura 1. Integrazione di chip in u sistema fluidicu

Sistema otticu

U signale di fluorescenza hè eccitatu da diodi emettitori di luce (LED) rossi è verdi è rilevatu da quattru contatori à fotoni singuli, chì raccolgenu signali rossi è verdi da ogni puntu in tutta a prufundità di u canale.

Dui signali indipendenti ponu esse monitorati simultaneamente nantu à u listessu puntu di misurazione, chì permette di misurà duie interazioni à tempu in una cunfigurazione di test à dui culori.
Figura 2. Cunfigurazione di l'ottica
A cullizzioni di signali da ogni puntu di misurazione hè gestita da un detector separatu, ciò chì pò purtà à piccule differenze in i conti grezzi. Per tene contu di questu, una tappa di nurmalizazione hè inclusa automaticamente in i testi di generazione di dati.

In più di i cuntatori di fotoni singuli, u strumentu hè dotatu di una camera CCD è di un microscopiu à luce riflessa. Quessi strumenti permettenu l'imaghjini cellulari in tempu reale, chì permettenu a valutazione di l'integrità cellulare è di a qualità di l'analiti durante tutta a misurazione.
Questa cunfigurazione cumminata assicura chì sia l'interazioni sia e cundizioni biologiche sianu tracciate, furnendu una valutazione cumpleta di l'esperimentu.

flussu di travagliu sciC

U prucessu di misurazione scIC pò esse divisu in 3 tappe chjave

Cuncepimentu sperimentale in heliOS: Ogni misurazione principia cù a cuncepzione di l'esperimentu in u software heliOS. U flussu di travagliu di l'analisi hè stallatu selezziunendu metudi predefiniti è aghjustendu i parametri sperimentali, cum'è a linea cellulare aduprata, a cuncentrazione di l'analiti è e cundizioni di u buffer. heliOS calcula automaticamente e quantità precise di cellule, analiti, buffer è altre soluzioni necessarie per a misurazione, simplificendu u prucessu di preparazione.
Preparazione di buffer, analiti è cellule: Dopu chì u disignu sperimentale hè statu finalizatu, i materiali richiesti sò preparati secondu e specificazioni furnite da heliOS. I buffer, l'analiti è e cellule sò caricati in l'automatiche di u strumentu.ampTandler.
Misurazione è Analisi di Dati: U sistema esegue a seria prugrammata di misurazioni d'interazione automatizate in tempu reale chì ùn richiedenu alcuna ulteriore intervenzione da parte di l'utente. I dati ponu esse analizati mentre a misurazione hè sempre in corsu per ottene informazioni immediate nantu à i risultati.

Saggi sciC in heliOS

In più di i testi di generazione di dati, u software furnisce ancu metudi per u test di chip, a pulizia è a manutenzione di strumenti.

Tavula 1. Analisi di generazione di dati verificati

sciC Kinetics	Misura a cinetica cumpleta nantu à e cellule cù l'associazione di l'analiti regulabile trà 1 è 5 concentrazioni, seguita da una sola dissociazione dopu a più alta concentrazione. Canale verde o rossu. Cuntene l'opzione per u test solu di l'analiti.
sciC Kinetics – Doppiu culore	Misura a cinetica cumpleta nantu à e cellule cù l'associazione di l'analiti regulabile trà 1 è 5 concentrazioni, seguita da una sola dissociazione dopu a più alta concentrazione. I canali verde è rossu sò attivati simultaneamente. Cuntene l'opzione per u test solu di l'analiti.
Dissociazione scIC - Doppiu culore	Misura a dissociazione di un analita da e cellule chì sò state pre-incubate cù un analita marcatu fluorescentemente cù un canale verde è/o rossu.

Preparazioni è Sviluppu di Test per a Misurazione di scIC

Ci sò uni pochi di punti da cunsiderà prima di cunfigurà una misurazione scIC

Cuncentrazione di l'analiti, gradu di marcatura, proprietà è qualità.
Soluzione di nurmalizazione è putenza d'eccitazione.
Qualità è manipulazione di e cellule.

Cuncentrazione di l'analiti è gradu di marcatura

Sicondu e pratiche standard di misurazione cinetica, ricumandemu di selezziunà un intervallu di cuncentrazione molare di l'analitu da 0.1x à 10x a costante di dissociazione di equilibriu prevista (Kd) per una cinetica di cuncentrazione multipla. Per a cinetica di cuncentrazione unica o e misurazioni di dissociazione, a cuncentrazione di l'analitu deve esse trà 1x è 10x u Kd previstu. U vulume di analitu necessariu calculatu per un tempu di associazione di 10 minuti à una velocità di flussu di 25 µL/min hè di circa 300 µL.
U Gradu di Marcatura (DOL) per un analitu duveria idealmente esse 1, ancu s'è i valori DOL di 2 o 3 sò sempre accettabili. Tuttavia, tenite à mente chì un numeru più altu di etichette nantu à un analitu pò influenzà e so proprietà di legame, è pò aumentà a probabilità di aggregazione o di legame aspecificu. Per ottene un DOL ottimale, seguitate u protocolu furnitu cù i Kit di Marcatura chì cuntenenu un colorante rossu o verde da a linea di reagenti heliXcyto.
Nurmalizazione
A nurmalizazione hè u primu passu in tutti i metudi di generazione di dati. Cumpensa e piccule variazioni di signale causate da l'usu di detectori separati per ogni puntu di misurazione. In questu passu, un colorante fluorescente à una cuncentrazione definita da l'utente hè iniettatu à l'iniziu di u test.
A cuncentrazione di a Soluzione di Normalizazione hè calculata multiplicendu a più alta cuncentrazione di analiti marcati fluorescentemente utilizata in a misurazione per u Gradu di Marcatura (DOL) di l'analita. Sta cuncentrazione guida a putenza d'eccitazione LED applicata durante a misurazione. L'obiettivu hè chì u piccu di a Soluzione di Normalizazione righjunghji apprussimatamente u listessu signale di fluorescenza. amplititude cum'è a più alta cuncentrazione di analiti.
Riferitevi à u graficu di cuncentrazione di a suluzione di nurmalizazione in a guida principale per stabilisce i valori iniziali. Nutate bè chì u graficu guida i paràmetri iniziali, ma a putenza d'eccitazione di i LED pò esse aghjustata ulteriormente durante u sviluppu di u test.

Qualità è Preparazione Cellulare

A viabilità cellulare deve esse superiore à 95%, è e cellule devenu esse generalmente in bonu statu. Per e cellule aderenti, ricumandemu di travaglià cù cellule chì sò 50-70% confluenti.
Per e cellule in sospensione, ricumandemu di coglie à a fase media di crescita logaritmica. 50 µl di sospensione cellulare à 1E+06 cellule/mL sò necessarii per ogni corsa.

Raccolta di cellule in sospensione

Centrifugà circa 2E+06 cellule à 300 g per 7 minuti per rimuovere i terreni di cultura cellulare. Scartà u surnatante.
Lavà e cellule una volta risospendendu u pellet cellulare in circa 1 mL di DPBS. Centrifugà a sospensione à 400 g per 5 minuti per fà pellettà e cellule viventi. Scartà cù cura u surnatante per rimuovere i frammenti è i terreni di coltura.

Risuspendere delicatamente in 1 mL di DPBS, trasferire la sospensione su un filtro cellulare e filtrare la sospensione per flusso di gravità.
Misurà a cuncentrazione cellulare di a sospensione filtrata è aghjustà à 1E+06 cellule/mL.
- TIP: Certe cellule in sospensione tendenu à furmà gruppi. Risuspendete delicatamente i gruppi è includete una fase di filtrazione prima di a prima fase di centrifugazione.
- Aduprate punte di pipetta à calibru largu quandu si maneghjanu sospensioni cellulari per evità forze di taglio elevate durante u trasferimentu o a risospensione.

Raccolta di cellule aderenti

Lavà e cellule cù DPBS sterile.
Dissociate e cellule da u matrazzu di cultura aduprendu u vostru reagente di dissociazione preferitu (per esempiu TrypLE).
Risuspendere e cellule dissociate à u vulume preferitu di media è filtrare cù un colino cellulare di 30 nm.

Opzionalmente, aghjunghje EDTA in casu di cellule fortemente aderenti (cuncentrazione finale 5 mM).
Centrifugà e cellule à 300 g per 7 minuti per rimuovere i terreni di cultura cellulare. Scartà u surnatante.
Risuspendere e cellule in 1 mL di DPBS.
Misurà a cuncentrazione cellulare è aghjustà à 1E+06 cellule/mL.
- TIP: I mezi cellulari diluiti 1:4 cù DPBS ponu esse aduprati per aghjunghje nutrienti à e cellule.amples in casu di cellule sensibili o di un flussu di travagliu di analisi longu.

Fissazione cellulare

Centrifugà finu à 10E+06 cellule à 300 g per 7 minuti per rimuovere i terreni di cultura cellulare. Scartà u surnatante.
Risuspendere u pellet cellulare in 1 mL di PBS, centrifugà è scartà u surnatante.

Risospendere il pellet cellulare in 500 µL di PBS/2% PFA (62.5 µL di soluzione di PFA al 16% + 437.5 µL di PBS).
Incubà e cellule à temperatura ambiente per 10 minuti (sottu agitazione delicata intermittente).
Aggiungere 500 µL di PBS e centrifugare la sospensione a 400 g per 5 minuti per rimuovere il PFA.

Scartà u supernatant.
Risospendere le cellule in 1 mL di PBS, filtrare attraverso un colino cellulare da 30 µm, centrifugare (400 g, 5 min) e scartare il surnatante.
Risospendere le cellule in circa 1 mL di PBS (opzionale: regolare a una concentrazione finale di 5E+06 cellule/mL).
Cunservà e cellule fisse à 2-8 °C, aduprà in un mese.
- Sè più cellule devenu esse riparate, per piacè aumentate tutte e quantità in cunsequenza.
- NOTA: A velocità di centrifugazione durante a raccolta di e cellule pò esse adattata à u tipu di cellula, se e cellule sò sensibili è si utilizanu cumunemente forze g più basse.
- A cuncentrazione di PFA pò varià trà 0.5 è 4%.

Cunfigurazione di u test scIC

I seguenti testi scIC devenu esse inclusi in u sviluppu di u test è ponu esse ripetuti in i flussi di travagliu di test più tardi.

U flussu di travagliu di sviluppu di l'analisi hè divisu in 3 tappe distinte è consecutive:

Test di chip citologicu
Test solu di l'analita
Saggio cineticu

Test di chip citologicu

A qualità di un novu chip deve esse valutata prima di utilizà un chip citologicu in una misurazione. Cuminciate per eseguì un test di chip citologicu separatamente. Vede u capitulu di u chip citologicu Helix in a guida principale nantu à cumu cunfigurà è valutà un test di chip.

Test solu di l'analita

U sviluppu di un test scIC principia cù un test solu di l'analite, chì valuta u cumpurtamentu di l'analiti marcati fluorescentemente nantu à una superficia di chip fresca senza cellule.

Questa prova pò ancu esse ripetuta periodicamente per valutà a stabilità di l'analiti marcati. U test scIC Analyte Only pò esse cunfiguratu in i test Kinetics attivendu a casella di cuntrollu Analyte only sottu à i paràmetri di a cella.
Per a valutazione di a qualità di l'analiti, a più alta cuncentrazione aduprata hè sufficiente è pò esse cunfigurata disattivendu tutte l'associazioni in u test, eccettu una.

Cunfigurazione di u flussu di travagliu di l'analisi cinetica

U test cineticu hè nurmalmente adupratu in un flussu di travagliu automatizatu chì cuntene sia test di generazione di dati sia elementi di mantenimentu. Una volta chì l'analita hà passatu u cuntrollu di qualità Solu test di analiti, pò esse adupratu in una misurazione nantu à e cellule.

Per quantificà i tassi cinetichi in modu affidabile, a risposta di u signale durante l'associazione deve esse dipendente da a cuncentrazione, aumentendu cù cuncentrazioni di analiti più elevate.
A più alta cuncentrazione deve ghjunghje à un plateau, ciò chì indica chì u statu stazionariu di ligame hè statu ottenutu. A dissociazione deve esse eseguita abbastanza longu per dislegà una parte significativa di l'analita ligatu (più di 5%) per permette un adattamentu affidabile di a curva.
Aduprate i parametri predefiniti in e cundizioni di l'analisi cum'è puntu di partenza è aghjustate ulteriormente secondu i vostri risultati.

Exampu 1. Flussu di travagliu di analisi cunsigliatu

U flussu di travagliu di l'analisi permette à l'utilizatori di mette in coda i metudi di misurazione è di mantenimentu secondu i so bisogni sperimentali specifichi.

Un flussu di travagliu di analisi pò include i seguenti passi in l'ordine indicatu:

Prime (Chip di mantenimentu)
Cinetica scIC (Cellule A, Analita A, Citochip)
Lavaggio di u sistema (chip di mantenimentu)
Cinetica scIC (Cellule B, Analita A, Citochip)
Lavaggio di u sistema (chip di mantenimentu)
Solu l'analita hà cunfiguratu a cinetica scIC (Analita A, chip Cyto)
- I passi di Prime è di Lavaggio di u Sistema sò realizati nantu à un Chip di Mantenimentu. Un Lavaggio di u Sistema hè inclusu quandu si passa à una linea cellulare diversa è prima di realizà u Test Solu Analiti à a fine di u flussu di travagliu.
- Per più dettagli, riferitevi à a sezzione nantu à u lavaggio di u sistema Cyto in a guida principale.
- Quandu si mette in coda i saggi cinetichi nantu à e cellule, cunsiderate a viabilità cellulare, chì dipende da a linea cellulare.
- Per e linee cellulari sensibili, hè cunsigliatu di fà solu 1-2 analisi per flussu di travagliu di l'analisi. Per e linee cellulari più resistenti, si ponu mette in coda analisi supplementari.
- NOTA: Per analisi supplementari, preparà a suluzione cellulare in fiale separate denominendu e cellule in modu diversu.
- Assicuratevi chì tutti i reagenti sianu freschi è filtrati attraversu un filtru di 0.22 µm. Infine, mette i reagenti preparati in u strumentu cum'è indicatu da heliOS.
- L'esecuzione pò esse iniziata clicchendu nantu à l'icona di a freccia blu "Eseguisce" è seguendu i passi in l'Assay Start Wizard.
- Una volta chì a corsa hè cuminciata, u dispusitivu funziona indipindentamente finu à chì tuttu u flussu di travagliu di l'analisi hè cumpletatu.

Analisi di l'esperimenti scIC

Flussu di travagliu d'analisi scIC

I dati scIC ponu differisce da i dati standard di i biosensori per via di a cumplessità naturale di l'eventi chì si verificanu nantu à e cellule catturate nantu à a superficia di u chip heliXcyto, chì pò purtà à irregolarità di u sensorgramma.

Dunque, u cuntrollu di qualità hè messu in risaltu per l'imagine catturate à ogni passu di misurazione è per i sensorgrammi generati in a pagina di destinazione di l'analisi automatizata.
Inoltre, heliOS furnisce strumenti per risolve l'irregolarità di i sensorigrammi durante l'analisi manuale di i dati scIC.

Prucessu d'analisi di dati sciC:

Ispezione di l'imagine:
- Ispettate tutte l'imagine catturate durante a misurazione (scheda Imagine in a finestra di l'esperimentu).
- Quante cellule sò rimaste stabili in e trappule durante tutta a misurazione?
- Chì ghjè u statu di e cellule ? Verificate a granularità è l'integrità cellulare.
- E trappule sò pulite dopu a tappa di rigenerazione?

Verificazione di dati grezzi:
- Esaminate i dati grezzi per u puntu di riferimentu 1 è u puntu di misurazione 2
- U signale di u piccu di nurmalizazione deve esse vicinu o più altu chè u signale di dati grezzi u più altu.
- U signale torna à u livellu di basa in i dui punti, o ci sò evidenze di ligame aspecificu?
Verificazione di dati nurmalizzati:
- I salti d'iniezione per u puntu 1 è u puntu 2 si sovrappongono currettamente?

Verificazione di i dati di riferimentu:
- A tappa di rigenerazione riporta u signale à a linea di basa ? Altrimenti, verificate s'ellu ci sò cellule o detriti in e trappule dopu a rigenerazione.viewinghjendu l'imaghjini.
- Ci sò picchi, valori anomali o altre irregolarità in e curve di riferimentu? S'ellu hè cusì, ricumandemu.view l'imagine per identificà e cause potenziali è cunsiderà l'aghjustamenti manuali.

Verificazione di l'adattamentu di i dati:
- Realizà una valutazione di a qualità visuale
- L'adattamentu descrive accuratamente u cumpurtamentu di e curve, o a linea di adattamentu attraversa u sensorgramma?
- L'adattamentu descrive currettamente a curvatura di i dati?
- Hè u ampLititude coerente cù i dati di riferimentu?

Analisi di dati automatizata scIC

L'analisi automatizata scIC processa i dati grezzi in grafici di cuntrollu di qualità è dati adattati in pochi clicchi.
1. Aprite un esperimentu scIC clicchendu duie volte nantu à l'esperimentu sceltu in a Lista di l'Esperimenti
2. Cliccate nant'à u grande buttone turchinu Analizà in fondu à a tabulazione di l'esperimentu.
3. Da u flussu di travagliu di l'esperimentu, selezziunate u test chì vulete analizà.
4. Sceglite Kinetics scIC trà i tipi d'analisi dispunibili è cliccate nant'à Next.
  - NOTA: Sè l'esperimentu hè sempre in corsu, solu i testi cumpletati saranu mostrati in a lista. Una volta chì un test hè sceltu, a finestra dopu mostrerà tutti i tipi d'analisi dispunibili specifichi per u metudu / test utilizatu.
5. Sè necessariu, cunfigurate l'analisi in a finestra seguente. U mudellu di adattamentu predefinitu hè "Cinetica - Livello finale liberu" cù a casella di cuntrollu "Forzà u livellu finale di l'adattamentu à Zero" attivata. Deviate da questu mudellu solu s'è a biologia o i dati richiedenu una descrizzione più cumplessa.
6. Una volta chì a cunfigurazione hè finalizata, cliccate nant'à Analizà per vede tutti l'istantanee derivate, i sensorgrammi grezzi è processati, è i valori cinetichi.
A causa di a cumplessità inerente di u sampQuandu si utilizanu metodi scIC per i test, i sensorgrammi risultanti ponu avè irregolarità.

Per risolve questu prublema, u cuntrollu di qualità di l'imagine è di i sensorgrammi hè messu in risaltu in l'analisi automatizata.
Sè sò necessarie currezzioni manuali o analisi più approfondite, l'arnesi per a currezzione di l'artefatti sò furniti in u Scratchpad di l'analisi manuale.

Mantenimentu è Decontaminazione di heliXcyto

A manutenzione di heliXcyto hè essenziale per assicurà e prestazioni è a longevità ottimali di u strumentu. A manutenzione regulare include procedure di pulizia chì impediscenu a contaminazione è mantenenu l'integrità di u sistema, permettendu risultati precisi è un funziunamentu lisciu. Una cura costante hè cruciale per l'affidabilità di u strumentu è a qualità di i risultati sperimentali.
A manutenzione di heliXcyto implica duie procedure chjave: Cyto System Wash, chì pò esse integrata direttamente in un flussu di travagliu di analisi, è Clean & Sleep, chì hè realizatu cum'è una rutina separata per mantene u strumentu ghjustu prima di l'usu dopu una misurazione precedente più longa di notte o quandu ùn hè micca adupratu per più di 2 ghjorni.

Sia System Wash sia Clean & Sleep richiedenu a presenza di un chip di manutenzione heliX® in u vassoio di chip.

Rutina di pulizia è di sonnu

A rutina Clean & Sleep hè destinata à a pulizia è à l'arrestu/almacenamentu di u dispusitivu. U metudu sciacqua i tubi fluidichi di un dispusitivu heliX® prima cù acqua ultrapura è dopu cù etanolu à 70%. Infine, tutti i tubi sò ventilati cù aria.
Questa prucedura di pulizia hè cumpletamente automatizata è dura circa 40 minuti. Durante a prucedura, l'etanolu hè espulsu in a buttiglia d'acqua, dunque u cuntenutu di a buttiglia deve esse scartatu dopu.

Dopu à una Clean & Sleep, u strumentu entra in modu di sonnu è ùn pò esse adupratu finu à chì ùn sia realizatu un Wake Up & Prime. Un chip di manutenzione heliX® hè necessariu per e duie esecuzioni.
IMPORTANTE: Per impedisce a contaminazione di i tubi, assicuratevi di scartà u cuntenutu di a buttiglia d'acqua (mistura acqua/etanolu) è svuotate u contenitore di rifiuti dopu a prucedura di pulizia.

Spegnimentu è almacenamentu à longu andà

Per periodi prolungati di inattività, cacciate a buttiglia chì cuntene acqua è etanolu dopu a prucedura Clean & Sleep da u vassoio di u tampone è lasciate u tubu espostu à l'aria.

Eliminate dinù u chip di mantenimentu heliX® è cunservatelu in u so saccu originale. Questu impedisce u refluxu è a contaminazione. Spegnete u dispusitivu.

Lavaggio di u sistema citologicu

heliXcyto System Wash pulisce in prufundità u sistema microfluidicu aduprendu a Soluzione di Pulizia 3 (CS3) in u corsu di circa 45 minuti. CS3 hè raccoltu in dui secondi.tages. Primu agulla è sampI circuiti sò pieni è incubati per eliminà qualsiasi contaminanti.
NOTA: Eseguite un Cyto System Wash almenu una volta à ghjornu quandu u dispusitivu hè in usu. Ricumandemu d'aghjunghje u metudu Cyto System Wash à un flussu di travagliu di analisi dopu ogni analisi (quandu si passa à una nova linea cellulare o se...)ampa qualità hè subottimale) o à a fine di un flussu di travagliu di analisi. Scambià u chip di mantenimentu dopu un massimu di 50 lavaggi di u sistema Cyto mostrati cum'è conteggio di rigenerazioni in u vassoio di chip view di u cuntrollu di u dispusitivu.

Cuntattu

Dynamic Biosensors GmbH
Perchtinger Str. 8/10
81379 Munich
Alemagna
Bruker Scientific LLC
40 Manning Road, Manning Park
Billerica, MA 01821

USA

L'infurmazione di l'ordine order.biosensors@bruker.com
Assistenza tecnica support.dbs@bruker.com
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Strumenti è chips sò ingegneriati è fabbricati in Germania.
Solu per usu di ricerca. Micca per usu in prucedure diagnostiche cliniche.

FAQ

FAQ di sciC

Possu riutilizà u chip heliXcyto?

Iè, u chip heliXcyto hè riutilizabile è dispunibule. Seguitate e linee guida di pulizia è di almacenamentu adatte.

Chì ghjè u scopu di u chip di mantenimentu?

U chip di mantenimentu hè adupratu per l'operazioni di pulizia, prova è manutenzione per assicurà u funziunamentu currettu di u sistema.

Quantu spessu deve pulisce u dispusitivu?

U sistema fluidicu di heliXcyto hè mantinutu pulitu cù i metudi Cyto System Wash è Clean&Sleep. Si cunsiglia di pulisce u sistema microfluidicu via Cyto System Wash nant'à un chip di mantenimentu dopu ogni analisi (in particulare quandu si cambia u tipu di cellula) o più tardi à a fine di un flussu di travagliu di analisi. A prucedura Clean&Sleep deve esse applicata ghjustu prima di l'usu dopu una misurazione longa precedente (per esempiu a mattina dopu un esperimentu di notte) o quandu heliXcyto ùn serà micca in usu per più di 2 ghjorni di spegnimentu.

Per quantu tempu ponu esse cunservate in l'apparechju e soluzioni: RB 1 / acqua / CS 1 / CS 3 / Soluzione di nurmalizazione ?

In generale, prima di ogni misurazione, tutte e soluzioni devenu esse esaminate per u vulume restante è per a putenziale turbidità o precipitazione. In tale casu, a soluzione deve esse scambiata immediatamente. L'acqua è RB 1 devenu esse rimpiazzati ogni ghjornu è RB 1 deve esse filtratu prima di ogni misurazione. A soluzione di nurmalizazione diluita pò esse aduprata per 2 ghjorni di fila. E soluzioni di pulizia sò stabili per circa 3 ghjorni.

Quantu tempu possu aduprà u chip heliXcyto?

A data di scadenza di u chip heliXcyto pò esse verificata in a tabulazione Chip tray in a sezzione Device in heliOS. Nisuna garanzia per l'integrità di u chip pò esse data dopu a data di scadenza. Tuttavia, finu à chì e trappule restanu stabili, a superficia hè pulita è u fondu di fluorescenza hè sottu à u cut-off indicatu in u Chip Test, u chip hè cunsideratu utilizabile per e misurazioni. Una pulizia esterna regulare di u chip (u kit di pulizia di chip CCK-1-1 hè cunsigliatu per esse realizatu dopu l'usu di u chip per prolongà significativamente a vita di u chip.

Per quantu tempu possu aduprà u chip di mantenimentu?

U chip di mantenimentu deve esse rimpiazzatu dopu à 50 lavaggi di u sistema (cuntati cum'è rigenerazioni in a tabulazione Chip tray di u cuntrollu di u dispositivu in heliOS).

Quantu spessu si deve fà u test di chip heliXcyto?

U Chip Test raccoglie informazioni nantu à u fondu di fluorescenza, a pulizia è l'integrità di u chip prima di inizià un novu esperimentu. Deve esse realizatu almenu una volta quandu si usa un novu chip, ma hè cunsigliatu di esse realizatu prima o à l'iniziu di ogni esperimentu per verificà u statu di u chip. Questu permette di aghjustà e cundizioni di misurazione è di tracciare anomalie in i sensorgrammi à u chip o à u dispusitivu.

Chì ghjè a chimica di marcatura di l'analiti?

Un colorante fluorescente rossu o verde, rispettivamente, hè accoppiatu da i nostri kit di marcatura via esteri NHS à amine primarie in analiti proteici (per esempiu lisine o N-terminale). I dettagli è una sezione di risoluzione di i prublemi ponu esse truvati in i nostri manuali heliXcyto Labeling Kit red dye (Labeling Kit red dye 2 CY-LK-R2-1) è heliXcyto Labeling Kit green dye (Labeling Kit green dye CY-LK-G1-1) da a nostra webbuttrega.

Induve truvà l'infurmazioni nantu à e credenziali è a licenza heliOS ?

U prucessu di inserimentu di credenziali è informazioni di licenza hè discrittu in a sezzione Installazione heliOS in a guida heliXcyto da a nostra websitu (guida heliXcyto). L'infurmazioni di a vostra licenza devenu esse salvate in u cartulare scIC nant'à u desktop di u PC heliXcyto, chì u nostru Specialista di l'Applicazione hà creatu durante a furmazione.

Chì sò i intervalli d'eccitazione/emissione di l'heliXcyto?

L'eccitazione in rossu hè 605-625 nm, l'emissione (rilevazione) hè 655-685 nm. L'eccitazione in verde 490-510 nm, l'emissione in verde hè 525-575 nm.

Quante volte devu misurà u listessu esperimentu per l'affidabilità statistica?

Per ottene tassi cinetichi medi affidabili, si cunsiglia di fà 3-4 ripetizioni di misurazioni cinetiche à 3 concentrazioni in una pupulazione cellulare omogenea. In un inseme di dati coerente, i tassi d'associazione è di dissociazione di e repliche devenu esse in una finestra di tempu 2-4.

Chì ghjè a sensibilità di e misurazioni scIC?

U limite di rilevazione inferiore in termini di espressione di u bersagliu dipende da a marcatura di l'analita, ma tipicamente scIC pò digià misurà a cinetica annantu à solu 1000-10000 molecule per cellula. Per aumentà a sensibilità, si cunsiglia di catturà almenu 5 cellule, è un DOL di l'analitu di 5-10 è a putenza LED devenu esse equilibrati per ottene u massimu di conti di fluorescenza.

Quali sò i limiti di rilevazione di l'heliXcyto in termini di velocità cinetiche?

Per piacè riferitevi à e specificazioni tecniche di l'heliXcyto per i limiti tecnichi più aggiornati, chì si ponu truvà in a guida heliXcyto (guida heliXcyto). Costante di dissociazione Kd: da 10 pM à 1 mM Costante di velocità di associazione kon: da 1E3 à 1E7 M-1s-1 Costante di velocità di dissociazione koff: da 1E-6 à 1 s-1 Per infurmazioni dettagliate, per piacè cunsultate a nostra guida heliXcyto da a nostra websitu.

Documenti / Risorse

BIOSENSORI dinamici heliX cyto Sistema di analisi di laboratorio cumpletamente automatizatu [pdfManuale d'usu
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Referenze

Manuale d'usu

BIOSENSORI dinamici heliX cyto Sistema di analisi di laboratorio cumpletamente automatizatu

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